在收到凍存細胞后，很重要的一點是迅速解凍使其立即復蘇并除去DMSO，然后將它們放置到培養基中。如果做不到上面這點，需將細胞存儲在液氮中（-130℃以下）。不要將凍存細胞儲存在高于-130℃的溫度下，這會使細胞存活率迅速下降。

　　ATCC細胞注意事項：

　　（1）欲冷凍保存之細胞應在生長良好（logphase）且存活率高之狀態，約為80–90％致密度。

　?。?）冷凍前檢測細胞是否仍保有其*性質，例如hybridoma應在冷凍保存前一至二日測試是否有抗體之產生。

　?。?）注意冷凍保護劑之品質。DMSO應為試劑級等級，無菌且無色（以0.22micron　FGLP　flon過濾或是直接購買無菌產品，如Sigma D-2650），以5～10ml小體積分裝，4℃避光保存，勿作多次解凍。Glycerol亦應為試劑級等級，以高壓蒸汽滅菌后避光保存。在開啟后一年內使用，因長期儲存后對細胞會有毒性。

　　ATCC細胞冷凍保存方法：

　　（1）傳統方法：冷存管置于4℃10分鐘→ -20℃30分鐘→ -80℃16～18小時（或隔夜）→液氮槽vaporphase長期儲存。-20℃不可超過1小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

　　（2）程序降溫：利用已設定程序的等速降溫機以-1～-3℃/分鐘之速度由室溫降至（-80℃以下）-120℃，再放在液氮槽vaporphase長期儲存。適用于懸浮型細胞與hybridoma之保存。

>> 返回首頁