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慢病毒整合插入位點標準品擴容

原載自:www.th84.com[技術資料頻道]  2025-05-30  瀏覽次數:309

慢病毒背景

 

慢病毒載體(Lentiviral vectors, LVs)是在人免疫缺陷病毒HIV-1的基礎上改造而來的,可以將大量的遺傳信息傳遞進宿主細胞,并且整合到細胞的基因組內,使其可以在細胞內穩定表達若干代。同時,由于它的毒力基因已經被剔除,作為假病毒可以在實驗室內較為安全的使用。慢病毒載體可以轉染多種細胞,包含原代細胞等難轉染的細胞。

 

 

慢病毒在Car-T細胞療法中的應用

 

 

 
 

基于慢病毒具有:

 

感染范圍廣、效率高,有效感染分裂和非分裂的細胞;

 

穩定性強,整合進基因組中,長期穩定表達外源的基因;

 

免疫原性低,安全性相對較高的特點,慢病毒被廣泛應用于細胞治療中。

 

 

CAR-T(Chimeric Antigen Receptor T-cell,嵌合抗原受體T細胞)療法是一種突破性免疫療法,通過基因改造患者的T細胞,使其表達特定的CAR(嵌合抗原受體),從而識別并殺傷腫瘤細胞。目前主要用于血液系統惡性腫瘤(如B細胞白血病、淋巴瘤),并逐步向實體瘤拓展。

 

 

慢病毒整合的特性

慢病毒是目前CAR-T主流轉導方式(FDA已批準的CAR-T產品中,約90%采用LV),慢病毒整合在細胞內是半隨機整合(偏好轉錄活躍區)。

1

慢病毒通過識別宿主表面受體,把RNA和蛋白轉運至胞內;

2

病毒RNA逆轉錄形成線性 雙鏈cDNA(含兩端LTR序列)

3

整合酶識別LTR,cDNA被整合到宿主基因組中;

4

外源基因隨宿主細胞分裂持續表達。

 

整合偏好性:

 

表格管理_Sheet1.png

 

整合位點分析(Integration Site Analysis, ISA)是基因治療產品(如CAR-T)臨床開發和上市后監測的關鍵環節,其法規要求由各國監管機構(如FDA、EMA)制定,旨在評估基因組整合的潛在風險(如插入突變、克隆擴增)。

 

目前檢測ISA的方法有LM-PCR、NGS、單細胞測序等,為了保證檢測的準確性,科佰生物開發了一系列慢病毒整合位點標準品供檢測機構使用,作為品質衡量的標尺對檢測能力進行判別。在前文 慢病毒整合位點標準品強勢來襲一文中,已對單克隆多插入位點單克隆單插入位點、性染色體插入位點 做了產品的說明及數據展示。近期科佰推出了5%  2% 整合頻率的慢病毒多克隆多整合位點參考品,由多個單克隆整合位點產品混合而來,覆蓋20個插入位點,分別來自11個不同染色體上的20個基因,如下表所示

 

表格管理_Sheet2(1).png

 

圖片1.png

 

Figure 1. 基因分布  

 

圖片2.png

 

 Figure 2. 染色體分布

 

每個位點經過LM-PCR(用于識別已知DNA與相鄰未知DNA的一種技術,可結合NGS,對IS進行高通量分析)、 NGS(捕獲探針法測序)技術檢測,Sanger測序驗證,以及dPCR檢測定標整合頻率,確保插入位點的準確定位和整合頻率的精準測量。

 

 

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如果您對我們的慢病毒多整合位點標準品感興趣,或希望了解更多信息,請聯系我們的銷售團隊。我們將竭誠為您提供優質的產品和服務,助力您的實驗室實現更精準、更高效的檢測。

 

 

產品列表

 

 

貨號

名稱

CBPL0007

慢病毒多克隆多整合位點參考品-5%

CBPL0008

慢病毒多克隆多整合位點參考品-2%

 

 


 

 


部分數據展示:


5%  chr3:4871944  ITPR1四種檢測結果:

 

LM-PCR結果

CBPL0007 LM-PCR(1).png

 

NGS結果

NGS 2.png

 

Sanger結果

 

3'LTR+ITPR1 chr3_4871940

 

L0007 sanger 1.png

 

ITPR1 chr3_4871944+5'LTR

 

L0007 sanger 2.png

 

dPCR結果

圖5.png

 

 

 

 

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