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人結腸癌細胞株凍存的原則是要逐步緩慢降溫

原載自:www.th84.com[行情動態]  2018-12-12  瀏覽次數:1628

  部分細胞在運輸過程中,人結腸癌細胞株由于不斷震蕩及環境不適,可能導致細胞破碎死亡,從而使培養基中漂浮很多細胞碎片及顆粒狀物質。這種情況下,平衡后,貼壁細胞用PBS洗兩遍再加新的培養基培養或者傳代至新瓶中培養即可;懸浮細胞可以離心(1000rpm,3min)收集細胞,并用PBS重懸后再離心一次,再用新的培養基重懸并接種細胞。
  人結腸癌細胞株凍存的原則是要逐步緩慢降溫,以避免細胞內部形成冰晶對細胞造成傷害。
  1) 貼壁細胞經消化、離心收集,懸浮細胞經離心收集;
  2) 大約106個細胞加入1ml凍存液(細胞培養液和10%DMSO),用吸管吹打,使細胞分散成單細胞懸液;
  3) 加入到凍存管中。如用1.8ml的凍存管,每管不要加入超過1.5ml的細胞懸液;
  4) 在凍存管上標明細胞名稱及凍存日期;
  5) 用厚布或衛生紙包裹凍存管,置于4℃半小時,然后置于-20℃兩小時,再置于-40℃兩小時,然后置于液氮上方置夜;第二天將細胞置于液氮中;如果僅想提取細胞內的東西可以直接放在-20度的冰箱中。
  6) 記下凍存管存放的位置,作好凍存記錄。
  人結腸癌細胞株注意事項:
  1、觀察細胞在低倍鏡(4或5X物鏡)下進行,否則不能準確判斷細胞的傳代密度。看細胞的形態請在10X或20X物鏡下。
  2、瓶中運輸培養基不能重復再用,請換用加雙抗的新培養基,細胞凍存后,培養基中可不加任何抗生素。
  3、有些細胞貼壁不牢,如發現貼壁細胞有脫落,可離心吹打后接種到新瓶內。
  4、收到細胞后,若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請及時與我們。
  人結腸癌細胞株是一種成團、貼壁生長的細胞,如果狀態好的情況下,生長非???,細胞形態是不太規則的三角形.在低濃度時,此細胞長梭型(不好描述),高濃度時長成一張地毯,后者才是狀態好的。

 

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